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以下是關(guān)于大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒的實驗使用說明：
BS-3461 大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒
一、檢測原理
采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入預(yù)先包被NN-T4抗體的酶標(biāo)板中，經(jīng)溫育后形成抗體-抗原復(fù)合物，洗滌后加入酶標(biāo)工作液，再次溫育后形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。加入底物TMB顯色，顏色深淺與NN-T4濃度呈正相關(guān)。
二、樣本要求
血清/血漿?：采集后室溫靜置2小時或4℃過夜，1000g離心20分鐘取上清，避免反復(fù)凍融。
組織勻漿?：用預(yù)冷PBS(0.01M, pH=7.4)按1:9重量體積比勻漿，5000×g離心5-10分鐘取上清。
注意事項?：含NaN3的樣本會抑制HRP活性，需避免使用。
三、實驗步驟
試劑準(zhǔn)備?：將濃縮洗滌液稀釋30倍，標(biāo)準(zhǔn)品按說明書稀釋。
加樣?：標(biāo)準(zhǔn)品和樣本分別加入對應(yīng)孔位，建議做復(fù)孔。
孵育?：37℃溫育60分鐘，洗滌去除未結(jié)合物。
加酶標(biāo)抗體?：加入HRP標(biāo)記抗體，再次溫育30分鐘并洗滌。
顯色?：加入TMB底物A/B液，避光反應(yīng)15分鐘。
終止與檢測?：加終止液后，450nm波長測OD值。
四、數(shù)據(jù)處理
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
根據(jù)樣本OD值計算NN-T4濃度，板內(nèi)/板間變異系數(shù)應(yīng)<10%。
五、注意事項
試劑盒需2-8℃保存，有效期通常為6個月。
顯色時間需嚴(yán)格控制，避免過度反應(yīng)。
實驗環(huán)境需清潔，避免交叉污染。
如需更詳細(xì)的參數(shù)(如標(biāo)準(zhǔn)品濃度范圍、線性回收率等)，建議參考試劑盒配套說明書。
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