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如何判斷ELISA實驗中洗滌步驟是否正確?
更新時間:2025-06-16瀏覽:164次

  如何判斷ELISA實驗中洗滌步驟是否正確?


  以下是天津本生判斷ELISA實驗中洗滌步驟是否正確的關鍵指標及驗證方法,Elisa試劑盒 綜合操作規范與結果分析:

  一、?直接觀察指標?

  孔內液體狀態?

  正確:洗滌后孔內清澈透明,無可見顆粒或殘留液滴。

  錯誤:液體渾濁、有絮狀物或孔壁掛液(提示洗滌不凈)。

  拍干效果?

  正確:垂直拍板后吸水紙上無液體殘留印記。

  錯誤:拍板后孔底仍有反光液膜(需增加拍干力度或次數)。

  二、?實驗過程監控?

  洗滌參數合規性?

  洗液量:每孔需注滿300μL以上,確保覆蓋全部孔壁。

  靜置時間:每次洗滌后靜置1-2分鐘,短于30秒可能影響去污效果。

  次數:至少3次,高背景樣本需增至5-6次。

  洗板機性能檢查?

  吸液殘留量應≤2μL,可通過注入染料溶液測試殘留。

  噴頭無堵塞,各孔注液量差異<5%。


試劑盒.jpg


  三、?結果驗證方法?

  異常現象? ?可能原因? ?糾正措施?

  高背景信號? 非特異性結合殘留 增加洗滌次數至5次,延長靜置時間

  復孔CV>15%? 孔間交叉污染或洗滌不均 檢查拍板動作,校準洗板機參數

  標準曲線線性差? 洗滌過度導致復合物解離 減少洗滌次數至3次,縮短靜置時間

  四、?質控對照驗證?

  空白對照?

  OD值應接近0(顯色底物本底),若>0.1需檢查洗滌液污染或殘留。

  陰性對照?

  顯色強度需低于臨界值(Cut-off)的1/3,否則提示洗滌不足。

  五、?特殊場景判斷?

  手工洗滌?:需確保每孔注液量一致,避免洗液溢出污染鄰孔。

  自動化洗滌?:定期用亞甲藍溶液測試洗板機覆蓋率,遺漏孔需人工補洗。

  通過上述多維度評估可系統性驗證洗滌效果,若問題持續建議更換洗滌液批次或聯系技術支持。

  注:以上資料僅供參考,如需更詳細說明,可參考具體品牌商附帶產品信息。

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